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| 流式細(xì)胞術(shù)檢測人和小鼠Th細(xì)胞亞群 |
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| 點(diǎn)擊次數(shù)：2557 更新時(shí)間：2010-11-08 |
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早在1986年Mosmann等[1]依據(jù)小鼠分泌的細(xì)胞因子譜不同將Th細(xì)胞分為Th1和Th2兩個功能不同的獨(dú)立亞群。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF- α等細(xì)胞因子，介導(dǎo)與細(xì)胞毒和局部炎癥有關(guān)的免疫應(yīng)答，參與細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、 IL-6、IL-10和IL13等細(xì)胞因子，其主要功能為刺激B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生抗體，與體液免疫相關(guān)。由于Th1/Th2 亞群及其相互之間的平衡在免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵的作用，Th1/Th2 平衡的失調(diào)與多種疾病的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有著密切的關(guān)系。目前已發(fā)現(xiàn)許多感染性疾病、自身免疫性疾病、過敏性疾病以及移植排斥反應(yīng)等都與Th1/Th2 平衡有關(guān)。因此建立穩(wěn)定有效的細(xì)胞內(nèi)因子檢測方法對于準(zhǔn)確說明Th1/Th2細(xì)胞的作用非常重要。目前檢測的主要方法有酶聯(lián)免疫法、ELISPOT法、熒光定量法及原位雜交等方法。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)因子是一種相對快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。我們參照國內(nèi)外的一些文獻(xiàn)，對于人和小鼠Th1和Th2細(xì)胞的流式檢測方法進(jìn)行了探索，并比較了兩者之間的不同。
材料與方法
試劑
PMA（Sigma）
貯存液：PMA 溶于DMSO 濃度為0.1mg/ml -20℃ 保存。
工作液：貯存液1:100 稀釋于RPMI 1640培養(yǎng)基中，此時(shí)為1µg/ml。
Ionomycin（Sigma）
貯存液：Ionomycin 溶于DMSO 濃度為1mg/ml -20℃ 保存。
工作液：貯存液1:20 稀釋于RPMI 1640 培養(yǎng)基中，此時(shí)為50µg/ml。
GolgiStop（內(nèi)含Monensin ，BD Pharmingen）
Cytofix/Cytoperm液、Perm/Wash液和FACS Lysing Solution，均購自BD Pharmingen。
抗體
細(xì)胞表面標(biāo)記抗體：抗人CD3-APC，CD8-PercP，CD8-CYC，CD4-CYC。抗小鼠CD4-CYC、CD8PE。
細(xì)胞內(nèi)因子抗體：抗人IL-4-PE, IFN-γ-FITC?？故驣L-4-PE, IFN-γ-FITC。以上抗體均購自BD Pharmingen。
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